时候：2023-03-02 15:10:17
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二、折旧额的核算体例
（一）牢固资产磨损代价升值的质变纪律。
为了切确地核算折旧额，即在通货收缩前提下，能抵补货泉升值的损失，在牢固资产寿命期各个时候阶段上所计较的折旧额之和，能够或许或许或许或许或许或许或许知足从操纵代价上规复原有牢固资产规模的须要，这起首就须要阐发牢固资产磨损代价升值的质变纪律。
牢固资产是持久操纵的物资材料，而出产性的牢固资产是物资产品出产进程中的歇息材料。是以，牢固资产再出产的进程是：
采办建造一托付操纵一报废几回再三采办建造。
从上述进程能够或许或许或许或许或许或许或许看出：建（购）置是牢固资产原始代价的始点，报废是牢固资产原始代价的起点。在寿命期中，牢固资产每一年在提取折旧后，其金额须要产生一个有形升值量。这个升值量的变更进程可用公式表现以下：
式中：Z代表牢固资产原值；Z’代表货泉升值的损失量；Y代表年折旧额；L代表物价下跌率；l，2…n代表时序；n代表牢固资产操纵年限。
在通货收缩前提下，为了避免牢固资产升值的损失，在核算折；日时，该当把升值（Z’）加到折旧额中，进入产品本钱，待产品出卖后，发出折旧以知足更新牢固资产的须要。
（二）核算折旧的公式假想。
下面从递加折旧的概念，考查牢固资产逐年递加的升值量的变更纪律的，但为了切确计较年折旧额，能够或许或许或许或许或许或许或许从别的一个角度察看这个题目，即一方面以全数牢固资产原值为基数，跟着时候的推移，因为通货收缩，货泉升值，可把逐年升值量加到牢固资产原值中去，使牢固资产从其性命的始点到性命的起点，仍能保值。另外一方面每一年提取的折旧额，从第～年底起头，直至折旧遏制为止亦逐年加进一个升值额，并假设牢固资产在报废时无残值，则可成立以下公式：
把上述方程作为以下清算，则：
清算后简得：
现仍以本文后面采办10辆汽车为例：
Z=100万元，n=10年
则该批汽车的年折旧额为：
计较成果，每一年提取13．8909万元，在10年物价总水平回升87．186%的前提下，在10年后依然能够或许或许或许或许或许或许或许采办载分量为4吨的10辆载重汽车。可是按传统的体例计较折旧，即100万元10年=10万元，在通货收缩前提下，所计较的折旧总额，是没法根据原有牢固资产操纵代价规模更新全数牢固资产，即没法保障牢固资产保值的。
三、核算折旧额的几个详细题目
经由进程实例证明，笔者觉得下面所设想并颠末推导，论证所成立的在通货收缩前提下，计较折旧额的公式是迷信的，但在操纵公式时，仍有以下题目需做进一步的研讨。
（一）价钱指数的挑选。
通货收缩，物价下跌，这是一个遍及的题目。但在现实经济糊口中，因为各类商品在国计民生中的感化差别，是以其物价下跌幅度是不不异的。是以，在我国现实任务中体例有各类性子的价钱指数。那末在计较牢固资产折旧额时，该当接纳哪一种价钱指数为好呢？笔者觉得，该当接纳国度统计局体例的牢固资产投资价钱指数。这一指数综合反映我国牢固资产投资价钱的变更水平，并且与折旧额的接洽最为慎密亲密。
（二）牢固资产升值率总额。
牢固资产折旧的计较是一个非常首要经济题目，它干系到切确评估企业经济效益与国度财务支出等题目。是以国度财务部分该当根据牢固资产投资价钱总指数与分类指数，斟酌到未来一段时代内经济成长的趋向，对价钱变更作出瞻望，并以定额参数的情势发布，供各企业计较折旧时接纳。固然咱们不否定拟定定额参数即货泉升值的定额参数是非常庞杂的任务。但为了保障这项任务的切确性与迷信性，能够或许或许或许或许或许或许或许在瞻望的根本上经有关专家会商，而后经有关权势巨子机构核准，再行发布接纳。
（三）定额升值率与现实升值率的题目。
货泉定额升值率与现实升值率是要产生离差的，是以，根据定额货泉升值率计较的折旧额和现实货泉升值率计较的数值之间，必须要产生一个差数，为此须要调剂。通俗来讲，在年度履行进程中，可按货泉定额升值率计较，待年关决算时，再根据现实货泉升值率遏制调剂，其公式以下：
YI=Y[l＋（L1－L）]
式中：YI代表调剂后的折旧额；Y代表按货泉定额或估计升值率折旧额；LI代表现实货泉升值率；L代表定额货泉升值率。
医治
本病属于免疫体系疾病，医治该病症必须加强免疫力，能够或许或许或许或许或许或许或许打针"免疫按捺剂"医治。
2照顾护士
照顾护士打算尽早拟定。患儿所患一种罕有的疾病，尽快确诊，主动共同大夫敏捷和有用地使一切支援查抄，皮肤科，儿科和其余科室会诊。对这类严峻的疾病评估，取得相干信息，并与大夫的医治打算，孩子们构造会商，拟定了详细的照顾护士打算，当真落实和不时改良的前提，并根据公道的谨严办法转变。
2.1发烧照顾护士 慎密亲密察看体温变更，天天6次丈量体温规复一般后3天，天天一次权衡，卧床歇息，补充养分和液体的温度后，实时改换汗湿衣服，以避免滴湿疹的产生。
2.2心思照顾护士 儿童有病愈的激烈欲望，经由进程耐烦压服，消弭惊骇的医治，医治能够或许或许或许或许或许或许或许成心识地赐与精力上慰藉。为家长慎密亲密协作遏制医治。
2.3 高卵白饮食和养分，高维生素，好食物和公道的准绳，以改良机体安康。增添人体的耐受化疗，进步免疫力。出格医治时，如吐逆，严峻且难以斟酌饮食或静脉高养分耗损的元素，以确保病人有充沛的热量，改良养分状况。
2.4病人的病情在手术前细心察看，察看腹部痛苦悲伤，地位，规模，腹胀情况排气排便情况的性子，使疾速，皮肤筹办，术前皮肤测试等，禁用止痛药，以防袒护病情。
2.5 患者手术后回到病房，以枕平卧4〜6小时，头正面，坚持呼吸畅达，须要时赐与吸氧。麻醉前作出明白，监测有不吐逆，腹胀，排气排便情况，坚持引流畅达胃肠减压性命体征及腹部病症慎密亲密察看，并察看引流液，色彩和数量标性子;制止在食物，杰出的口腔照顾护士，根据大夫的定见公道补充水份和电解质溶液;术后初期的半卧位，鼓动勉励初期勾当，避免肠粘连，这将有益于身材规复;爬动规复。恰当的饮食应少很多餐，逐步竣事，并察看是不是进食后腹痛，腹胀，吐逆等病症，若是上述病症，应停息进食，看看是不是有肠阻塞，符合口狭小等并发症;该察看伤口无出血，渗液，肿胀，坚持伤口敷料洁净枯燥，避免尿液净化伤口。
2.6药物不良反映及照顾护士 对化疗药物的胃肠道不良反映的各类察看是遍及的。在化疗前或口服止吐药归天疗时代的饮食，以削减恶心和吐逆，静脉打针30分钟要轻和消化。做三查七对的。（1）长春新碱致使末梢神经炎，皮肤，肌肉和枢纽四肢麻痹，痛苦悲伤，腹痛，肝，肾功效表现应当是掩护，注重血液中的变更，低白血细胞分手应当很好对各类传染的掩护;（2）高剂量甲氨蝶呤连系6 - MP的时候。使胃肠道反映，口腔炎，口腔溃疡恶化。首要的骨髓按捺，国会议员在6个半小时，晚餐后口服，逐日一次，以加重反映，同时加强口腔照顾护士，甲氨蝶呤输液，能够或许或许或许或许或许含有冰或冷水，以削减口腔黏膜和菜，氨浓度的甲氨蝶呤（3）VP16的操纵，应慎密亲密察看有不泄露，一旦发明，应当即遏制输液，以避免构造坏死和（或）血酸静脉炎。 16输液的副总裁会激发性低血压，它会促使孩子扯谎，缓慢的速率静脉滴注。
1 材料和体例
1.1 临床样本搜集
莳植体四周炎的骨构造样本来自中国总病院莳植科，拔取患者春秋小于即是60岁、莳植体植入年限小于即是3年、莳植于磨牙区且因莳植体四周炎呈现莳植体零落的患者4例，刮取莳植体附着和莳植窝中的骨构造。一般构造来历的样本来自中国总病院口腔内科，拔取4例身材安康的不异春秋段的第三磨牙废除术患者，夹取舌侧骨板。一切患者均解除牙周炎，且近期不急性传染、糖尿病、家属遗传病和骨质松散症等满身材系性疾病。本研讨已中国总病院伦理委员会核准，且每例患者均签订了知情赞成书。
1.2 成骨细胞的分手培育与纯化
PBS频频冲刷5次构造块，将较大的构造块剪为1 mm3巨细，转移至离心管中，插手含有13.7 g·L-1 Ⅳ型胶原酶（北京索莱宝科技无限公司）和5 g·L-1胰卵白酶（Amresco公司，美国）的消化液，37 ℃震动消化45 min。1 000 r·min-1离心8 min，去上清，插手H-DMEM培育液（GIBCO公司，美国）和10%胎牛血清（Invitrogen公司，美国），吸管频频奏乐成细胞悬液，接种培育皿中，置于37 ℃、5%CO2孵箱内培育。24 h后察看细胞贴壁及成长情况，待铺皿80%遏制传代。接纳频频贴壁法[3]对细胞遏制纯化。
1.3 碱性磷酸酶鉴定染色
将第3代分手纯化后的成骨细胞以每孔1×104个的密度接种于24孔板，细胞达70%时，用4%多聚甲醛在4 ℃牢固30 min。PBS频频冲刷后，操纵碱性磷酸酶试剂盒（Sigma公司，美国）染色1 h。PBS频频冲刷后，在颠倒相差显微镜下遏制惯例察看及摄影。
1.4 MTT法检测成骨细胞的增殖才能
取对数生持久第3代细胞，经胰卵白酶消化后离心插手DMEM（10%胎牛血清）遏制成细胞混悬液，调剂密度为2×104个·mL-1接种于96孔板，每孔0.2 mL。贴壁后隔天换液，延续培育8 d。每隔24 h取3孔，每孔插手20 μL 5 g·L-1 MTT溶液，37 ℃、5%
CO2[专业供给写作论文和论文写作办事，接待您的惠临dylw.net]孵箱中孵育4 h，插手二甲基亚砜200 μL。接纳酶联免疫检测仪490 nm波长下检测吸光度值，尝试频频3次。
1.6 Western blot法检测成骨细胞相干卵白OCN的抒发
取第3代细胞遏制接种，培育7 d后，将细胞用0.01 mol·L-1 PBS频频冲刷3遍，裂解细胞提取卵白。取等量卵白经8%十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳后，将凝胶转移到聚偏二氟乙烯膜上，脱脂奶粉封锁留宿。插手鼠抗人OCN（Abcam公司，英国）（1︰1 000浓缩）和β-actin（1︰2 000浓缩），37 ℃孵育2 h，洗膜后，经辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG2a（Abcam公司，英国）（1︰4 000浓缩）孵育50 min，化学发光法显现抗原抗体复合物，X线片显影并定影，一切杂交旌旗灯号经成像阐发仪体系测定条带密度遏制定量阐发，以目标卵白灰度值与内参β-actin的比值表现卵白的抒发水平。
1.7 统计学阐发
接纳SPSS 13.0软件遏制统计阐发，自力样本t查验遏制两组间比拟，P<0.05为有统计学差别。
2 成果
2.1 成骨细胞的分手培育及纯化
莳植体四周炎来历的成骨细胞与一般构造来历的成骨细胞在培育进程中状况根基不异，10～14 d时从构造块中爬出，外形多为不法则形和三角形（图1）。频频贴壁法纯化成骨细胞贴壁后，2种来历的细胞在形状学上无较着差别，细胞均呈长梭形和多边形，胞核可见多核仁，呈圆形或卵形（图2）。
2.2 碱性磷酸酶鉴定染色
细胞牢固后按碱性磷酸酶活性检测试剂盒请求遏制检测，可见蓝玄色颗粒堆积在胞浆碱性磷酸酶活性部位（图3）。2种来历细胞都表现出了碱性磷酸酶阳性，但一般构造来历的成骨细胞比莳植体四周炎来历成骨细胞内可见更多染色颗粒。
2.3 2种来历的成骨细胞增殖才能的比拟
MTT检测成果（图4）标明，一般构造来历与莳植体四周炎来历的成骨细胞都表现出了必然的体外扩增才能，从第4天起2种来历细胞的增殖才能呈现统计学差别（P<0.05），莳植体四周炎来历的成骨细胞的增殖活气较着低于一般构造来历的成骨细胞。
2.5 2种来历的成骨细胞相干卵白的比拟
Western blot检测成果标明，培育7 d时，与一般构造来历的成骨细胞比拟，莳植体四周炎来历的成骨细胞OCN的抒发降落，绝对灰度值阐发标明莳植体四周炎来历的成骨细胞OCN的抒发水平约为一般构造来历的1/3（P<0.05）（图6）。
3 会商
骨连系是牙莳植手术的根本。莳植体与颌骨骨性连系面的构成与莳植区的骨密度慎密亲密相干，骨密度越高，莳植体与骨的连系率就越高[4]。莳植体四周炎恰是在炎性微情况下，粉碎了莳植体与颌骨的骨连系，从而使莳植体四周支持骨构造的功效损失。成骨细胞在骨构造的修复和改建中起到首要感化，是保持骨构造推陈出新[专业供给写作论文和论文写作办事，接待您的惠临dylw.net]的首要细胞；是以，研讨炎症构造来历的成骨细胞很成心义。
本研讨从莳植体四周炎莳植体零落患者的颌骨骨构造平分手培育取得了炎症构造来历的成骨细胞，经由进程比拟炎症构造来历的成骨细胞和一般构造来历的成骨细胞的增殖才能和相干骨构造修复基因的抒发等生物学功效变更，切磋炎性微情况对成骨细胞生物学功效的影响。
本尝试选用的成骨细胞均为第4代之内的细胞，成果标明，炎症构造来历的细胞在体外培育后依然具备必然的炎症构造来历特同性。炎性细胞因子和莳植体四周炎致病菌的毒力因子会致使成骨细胞的增殖才能较着 降落。本研讨成果显现，莳植体四周炎来历的成骨细胞固然在形状学上并不表现出和一般构造来历的成骨细胞有较着差别，可是在细胞增殖活气方面表现出了差别，莳植体四周炎来历的成骨细胞的增殖活气全体低于一般构造来历的成骨细胞。笔者觉得这是因为莳植体四周炎的炎性微情况按捺了成骨细胞的增殖才能。
Runx2和Col Ⅰ是反映成骨细胞分解才能的首要目标，Runx2是成骨细胞分解的关头转录因子，在骨构造的构成与重修进程中具备首要的感化[5]。炎性因子会影响Runx2的抒发从而按捺成骨细胞的分解才能[6-7]。Col Ⅰ是成骨细胞分解成骨的首要基质。研讨[8]标明，莳植体四周炎的龈沟液中Col Ⅰ水平降落。本研讨成果显现，莳植体四周炎来历的成骨细胞的Runx2和Col Ⅰ抒发水平比拟一般构造来历较着降落，标明炎性微情况可影响成骨细胞的成骨分解才能，按捺Runx2和Col Ⅰ的一般抒发，这与Liu等[9]对干细胞的研讨成果分歧。
OCN与成骨细胞的矿化慎密相干，在必然水平上反映了成骨细胞矿化的才能。学者[10]研讨证明炎性微情况会降落[专业供给写作论文和论文写作办事，接待您的惠临dylw.net]OCN的抒发。本研讨中，莳植体四周炎来历的成骨细胞因为在炎性微情况降落落了OCN mRNA的抒发，从而致使OCN卵白水平也较着降落。可见炎性微情况按捺了成骨细胞矿化的才能。
人非小细胞肺癌NC-H446细胞株由中国医科大学细胞室供给，我院尝试中间细胞室保管。
1.3 首要仪器
美国SHELLAB2300型CO2细胞培育箱；日本Nikon颠倒相差显微镜；美国Sfat主动酶标阐发仪；美国FACScan流式细胞仪等。
1.4 尝试体例
1.4.1 肺康饮含药血清的制备
1.4.3 细胞培育
1.4.4 肺康饮含药血清对NC-H446细胞增殖的影响
按捺率（%）=（1- OD尝试组/ OD对比组）×100%
1.4.5 肺康饮含药血清引诱肺癌细胞凋亡抒发的测定
1.5 统计学体例
接纳多身分方差阐发法检测组间差别的较着性。一切统计学查验均操纵SPSS11.5统计软件遏制。
2 成果
2.1 肺康饮含药血清对NC-H446细胞增殖的影响
2.2 肺康饮含药血清对NC-H446细胞凋亡的影响
3 会商
1医治现况
西医对本病的病机还没有有一个同一的规范，临床医治多辨证操纵益气活血，养阴清热，健脾祛湿，温经通络，补益肝肾，温阳散寒，活血化瘀，或共同中药外洗内服等体例，大都医家觉得瘀血内阻是本病的根基身分。是以，活血化瘀应贯串疾病一直，临床上也多以活血化瘀丹方为主，疗效肯定。西医医治体例首要有药物医治、手术医治、到场医治。药物医治包含抗栓和扩大血管医治，主动的医治高血压、高血脂，防治动脉软化，不变斑块，避免斑块分裂。手术医治首要指重修肢体血运，包含动脉内膜剥脱术、血管旁路移植术和血管腔内医治术；ASO的到场医治仍范围于短段病变，短段主髂动脉病变的球囊扩大和支架置入术成果较好；另外，跟着狭小的逐步构成，肢体的侧支轮回随之逐步成立[3]，使得一些医家逐步注重到操纵血管内皮细胞成长因子等引诱血管天生的基因医治。
2补肾与动脉软化性闭塞症干系
动脉软化性闭塞症多见于中老年患者，人到中年今后，肾中精气逐步削减，呈现肾虚。肾阴虚则脏腑百脉、形体器官失充，血液凝涩，头绪失养，则患者表现为肢端色黑坏死破溃，剧痛，夜不能眠，肢端潮红或暗红，肢体肌肉较着萎缩，皮肤干皱、口渴、便秘、溲赤，发烧；肾阳虚则阳气亏虚有力鞭策、和煦气血以荣四末，致血行缓慢不畅而瘀，则指（趾）端坏疽或溃疡、四肢发凉，患处皮肤温度较低，肤色惨白，脉搏削弱或消逝等。笔者觉得肾虚是造本钱病血脉闭塞的关头关头，在医治本病中补肾也起着关头的感化，鹿茸性甘、咸、温，归肝、肾经，具备补肾阳、益精血、强筋骨、调冲任、托疮毒之功效，鹿茸对动脉软化闭塞症的防治感化首要有以下几点。
2.1鹿茸可增进血液天生和血行西医觉得，鹿茸能够或许或许或许或许或许使人体肾精充盛，避免朽迈，壮肾阳，肾阳可增进机体的和煦、活动高兴和化气功效，负气的活动加快，则血的输布运转也加快，气化加快则产热增添，使和煦感化加强，使阳虚患者患肢血脉取得温养而加重病情。鹿茸还可益精血，强筋骨，为血肉无情之品，使动脉软化性闭塞症患者患肢血液充沛，血脉取得濡养，有助血行。李召[4]研讨发明鹿茸对一般及白血病骨髓与人骨髓单个核细胞有促增殖感化，能增进骨髓造血，并且鹿茸有按捺红细胞凝固和增进纤维卵白消融的感化[5]。
2.2鹿茸可增进血管重生鹿茸在医治动脉软化性闭塞证中还和增进血管重生有关，研讨发明温阳药物鹿茸能增进人骨髓间质干细胞的增殖活性，而骨髓是一个自然的细胞成长因子库，在其成长进程中，成骨细胞、神经细胞、成纤维细胞及上皮细胞的成长同步遏制[6]，血管内皮细胞的祖细胞（endothelialprogenitorcells，EPCs）首要存在于骨髓。何秀娟等[7]发明鹿茸能增进离体人脐静脉内皮细胞的增殖，提醒在体内能够或许或许或许或许或许增进EPCs的增殖，增进血管天生。血管内皮祖细胞是成年个别中与血管重生干系最为慎密的干细胞成份，是血管内皮细胞的前体细胞，EPCs的增殖、趋化、分解，到场重生血管的构成，它能够或许或许或许或许或许或许或许被细胞因子或来自于外周血中的血管成长因子旌旗灯号带动到外周轮回而进入外周血管构造中，经由进程整合到血管壁或供给成长因子两种体例来促使重生血管的构成[8]，重生的血管为缺血部位供给氧、养分物资和生物活性物资，进一步增进缺血部位血管重生，改良缺血状况。西医觉得肾主骨生髓，骨者，髓之府，是以，补肾可生髓，从这点也提醒了鹿茸能够或许或许或许或许或许或许或许增进骨髓增殖。血液中的内皮祖细胞对构造缺血有反映，人外周血中培育扩增的EPCs，在肢体缺血的植物体内，能够或许或许或许或许或许或许或许特同性地向缺血部位趋化，到场血管天生，增添毛细血管数量，具备改良构造血流的医治感化。向缺血部位趋化的详细机制还不清楚，能够或许或许或许或许或许与缺血所构成的部分低氧血症、缺血构造开释的某些细胞因子和炎性因子，对这些细胞的趋化能够或许或许或许或许或许阐扬了必然感化[9]。
2.3鹿茸可增进疮口愈合西医觉得鹿茸有托疮毒之效，可用于疮疡久溃不敛，或阴疽内陷不起，可温补精血，托毒外出和生肌之效，对动脉软化闭塞症后期呈现的破溃频频难愈有托毒和生肌之功，可增进疮口愈合。古代医学发明，马鹿茸多肽经由进程增进表皮细胞和成纤维细胞增殖加快皮肤创伤愈合[10]。
3小结
鹿茸性甘、咸、温，归肝、肾经，具备补肾阳、益精血、强筋骨之功效，可用于肾阳缺乏、精血亏虚、筋骨有力之症，为补肾之良药。这从传统实际方面提醒了鹿茸具备促造血，减缓肢体不适之功效，笔者在临床中也碰到此病患者甚多，常赐与芪芍复脉汤[鹿茸2g（研末冲服），黄芪30g，白芍18g，桂枝10g，当归15g，麦冬15g，玄参15g，川芎10g，全蝎10g，川牛膝15g，土元10g，乌药10g，丹参30g，三七粉3g，阿胶6g，甘草6g]，随症辨证加减，意在用芪芍复脉汤益气活血，滋阴复脉，加鹿茸意在温补肾阳，又补益精血，强筋骨，规复阳气和煦鞭策之力，使精血充盛，临床操纵，成果较着，并且很多患者在病情恶化的同时病变部位血管彩超发明重生血管且血流畅达。
古代研讨觉得鹿茸多肽既对表皮细胞和成纤维细胞具备较着的增进增殖感化，加快创面愈合的品质和速率，又可增进血液运转，增进血管内皮细胞的增殖分解和迁徙，增进病变部位血管天生，这些都标明鹿茸对动脉软化性闭塞症的防治有着主动的感化，加上西医觉得鹿茸乃血肉无情之品，能够或许或许或许或许或许或许或许补肾填精，由以上能够或许或许或许或许或许或许或许揣度，鹿茸骨髓EPCs增进血管重生，鹿茸是不是还具备把EPCs带动到外周缺血构造的感化，是不是须要益气活血类药物来增进它的转移，这些另有待进一步的尝试及临床察看，但这一发明对缺血性疾病的医治供给了一个新思绪。董蔚等[9]在体外扩增EPCs的根本上，进一步察看了EPCs在植物体内促血管天生的感化，EPCs可特同性地散布在缺血肢体的血管布局中，缺血部位的侧支轮回构成和毛细血管重生能够或许或许或许或许或许与外源性血管成长因子、基因或内皮祖细胞转入构造中有关，咱们能够或许或许或许或许或许或许或许发明和操纵一些药物或成长因子增进EPCs抒发、增进EPCs从骨髓向外周带动，进步轮回中的血管内皮祖细胞的数量，或经由进程移植体外扩增的EPCs来加强缺血构造的血管再生，从而增进重生血管的构成。鹿茸在医治动脉软化性闭塞症中起着首要的感化，跟着对其感化机制的深切研讨，很有能够或许或许或许或许或许寻觅到医治ASO的有用路子。
参考文献：
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[3]刘昌伟.下肢动脉软化闭塞症的内科医治[J].血管内科，2006，7（2）：13.
[4]李召.鹿茸组分对人骨髓造血细胞体外增殖影响的研讨[D].大连医科大学学位论文，2006.
[5]久保品德.梅花鹿茸和马鹿茸的乙醇浸提物对血流能源学的影响[J].特产研讨，1997（4）：4.
[6]崔昊震，尹明浩.鹿茸成长因子的研讨现状[J].延边大学医学学报，2006，29（l）：7072.
[7]何秀娟，李萍，邱全瑛，等.几种外用中药成份对离体人脐静脉内皮细胞增殖的影响[J].中国病理心理杂志，2004，20（5）：832835.
【注释快照】：
石墨烯(Graphene)是一类单原子层二维原子晶体,于2004年初次从石墨平分手取得[1],其丰硕而优良的电学、力学和热学机能[2]使其成为最近几年来纳米材料范畴的研讨热点。氧化石墨烯(Grapheneoxide,GO)是生物医学范畴操纵较多的石墨烯衍生物之一,操纵Hummer体例[3],由石墨经化学氧化
取得全文
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 冯翠霞;张艳;林丽玲;张彩虹;陈剑刚;;高效液相色谱法测定尿中马尿酸、甲基马尿酸三种同分异构体[J];广东化工;2010年07期
目标研讨苍术挥发油对成骨样细胞UMR-106的增殖感化。体例苍术挥发油和UMR106 成骨样细胞体外共同培育，用MTT 法检测细胞增殖。成果挥发油在0.001 mg/ml 培育48h具备最强的增进细胞增殖感化。论断苍术挥发油中能够或许或许或许或许或许含有增进成骨细胞增殖的活性成份。
【关头词】 苍术挥发油 增殖感化 成骨样细胞UMR－106 MTT 法
Abstract：ObjectiveTo research the proliferative effects of essential oil in Atractylodes lancea on osteoblast - UMR-106 cells .MethodsOsteoblasts－UMR-106 cells were cultured with essential oil of Atractylodes in vitro，and MTT method was used to detect the cell proliferation. ResultsEssential oil of Atractylodes lancea at a concentration of 0.001 mg/ml， within 48 h ，strongly stimulated the proliferation of UMR-106 cells.ConclusionEssential oil of Atractylodes lancea probably has some chemical compositions which can stimulate the proliferation of UMR-106 cells.
Key words：Essential oil in Atractylodes lancea; Proliferation effect; UMR-106 cell; MTT method
苍术（Rhizoma atratylodes）为菊科植物南苍术Atractylodes lancea ( Thunb.) DC.或北苍术Atractylodes chinensis Koidz.等的枯燥根茎。苍术性辛、苦、温，归脾、胃、肝经，具备燥湿健脾、祛风散寒、明目感化。主治脘腹胀满、泄泻、水肿、风湿痹痛、风寒、伤风等［1］。
苍术在西医临床中操纵非常普遍。已有研讨发明苍术挥发油增添去卵巢雌性大鼠的骨钙含量（闫雪生《苍术油软胶囊的研制》。山东西医药大学硕士学位论文，2002），但对苍术挥发油是不是影响成骨细胞的增殖，还没有见报道。本尝试研讨苍术挥发油对成骨细胞UMR-106的增殖感化。
1 材料与体例
1.1 材料
苍术药材购自上海德康药业无限公司，经中国第二军医大学药学院生药教研室黄宝康副传授鉴定为苍术Atractylodes lancea (Thunb.) DC.的枯燥根茎。
1.2 试剂
DMEM 培育基(Cibco)；3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基-四唑氢溴酸盐MTT(Sigma)；胎牛血清FBS(杭州四时青生物工程材料研讨所)；胰卵白酶(Cibco)；别的试剂均为国产阐发纯。
1.3 体例
1.3.1 挥发油样品的制备水蒸气蒸馏法：将药材样品粉碎过40目筛，切确称取200 g的苍术，加水浸泡1 h，而后用挥发油提取器按惯例水蒸气蒸馏，提取直至挥发油的量不再增添，蒸馏液用正己烷萃取，萃取液用无水硫酸钠枯燥，过滤，微热蒸去溶剂得挥发油样品，挥发油样品为淡黄色通明油状物，具备安慰性气息。取50 mg挥发油样品溶于1 ml二甲基亚砜中，用灭菌过的0.2 mm 滤器( Gelmann Sciences) 除菌，并于4℃保管，备用。临用时用DMEM培育液浓缩至所需浓度。
1.3.2 成骨样细胞UMR－106的培育［3］UMR－106 (大鼠成骨血瘤细胞系) 细胞株获赠于江苏镇江医学院病原生物教研室，源于美国麻省医学院。将UMR-106细胞培育于10％胎牛血清（100KU/L青霉素，100 mg/ml链霉素）的无菌DMEM培育基中，置37℃，5%CO2培育箱中遏制培育。取成长状况杰出的细胞，用0.25％胰卵白酶消化，加含胎牛血清的培育基制成细胞悬浮液，调剂细胞浓度为5×106个/ml接种于100 ml培育瓶中，二氧化碳培育箱中孵育，2～3 d换液1次。
1.3.3 MTT 法测定细胞的增殖［2］取对数生持久细胞消化计数后，用含血清的DMEM 细胞培育液将细胞浓度浓缩至1×105个/ml ，铺入96孔细胞培育板中(100 μl/孔)培育24 h后插手含差别浓度挥发油(每一个浓度6孔)的无血清DMEM培育。竣事培育4 h前弃去培育液，每孔插手20 μl MTT(5 mg/ml，用PBS配制)延续孵育4 h，有蓝紫色积淀天生，每孔插手150 μl二甲基亚砜(DMSO) ，振荡10 min待积淀完整消融，用酶标仪以550 nm 为测定波长、650 nm为参比波长测定吸光值，以不加中药的细胞孔测得的吸光值为空缺，用t查验遏制各加药组与空缺组之间均值的比拟。细胞增殖率的计较以下：
增殖率（%）= Ai尝试组- Ao对比组Ao对比组×100%
Ai：差别前提下的吸光值；Ao：空缺组的吸光值
2 成果
2.1 MTT 法测定细胞增殖与吸光度的干系将UMR-106细胞别离以6个差别浓度(1×105～1.2×106个)铺入96 孔板，培育8 h贴壁后，用上述体例测定每孔吸光度(Y)，与细胞数量(X)作线性回归，得规范曲线方程：Y=0.054+0.092 6×10-6X(r=0.986 0，n=6)，二者具备杰出的线性干系。见图1。
2.2 挥发油对细胞增殖的感化用1，0.1，0.01，0.001 mg/ml 4种浓度的挥发油感化于细胞24 h，在λ＝550 nm测定其吸光值。成果见表1 。表1 差别挥发油浓度对UMR-106的增殖感化(略)
苍术挥发油浓度0.001 mg/ml时培育24 h，可较着增进细胞的增殖，细胞的增殖率为10.44%。在低的浓度下对细胞增殖有轻细的按捺感化，标明挥发油短时候内操纵低浓度较好。
为了察看挥发油促细胞增殖的最适合的感化时候，用浓度为0.001 mg/ml的苍术挥发油感化于细胞别离为24，48，72 h ， 在λ＝550 nm测定其吸光值。成果见表2。表2 差别感化时候对细胞增殖的影响(略)
由表2可见，当挥发油在浓度为0.001 mg/ml感化24 h时能较着安慰UMR-106增殖，在近48 h时增殖率为20.96％， 到达最强，72 h 时细胞数量又降落。
3 会商
苍术挥发油在0.001 mg/ml浓度下感化24，48 h，均对UMR-106增殖有较着的增进感化。UMR-106大鼠成骨血瘤细胞系从形状和性子上都保留了成骨细胞独占的特色， 并且具备不变、均一、纯度高档长处。 是以，UMR-106 细胞作为一种国际公认的成骨细胞系能够或许或许或许或许或许或许或许用来取代成骨细胞［3］。在骨构成最后阶段的成骨细胞增殖期， 成骨细胞数量增添， 构成多层细胞并分解、排泄I型胶原以便终究矿化构成骨结节。成骨样细胞的增殖与细胞培育液中药物的成份有关， 与成骨样细胞UMR-106共同体外培育的体例能够或许或许或许或许或许作为对骨构成有增进感化的活性化合物的挑选模子， 颠末进一步的植物体内尝试从这些活性药物中追踪对骨构成有增进感化的活性成份。是以，以成骨样细胞UMR-106 的增殖为活性目标，察看了苍术挥发油对该细胞系增殖的感化。因为接纳的是苍术挥发油和细胞共同体外培育的体例，猜测苍术挥发油中含有间接安慰成骨样细胞增殖的成份，为苍术医治骨质松散症供给开端挑选，详细机制有待进一步研讨。
【参考文献】
Effect of CD24 on cell proliferation capability in melanoma cells
LI Ming, LI Yan, CHEN Wei-qiang, et al.School of Basic Courses, Guangdong Pharmaceutical College, Guangdong 510006, China
【Abstract】 Objective To study the effect of CD24 on the proliferation ability of melanoma cells. Methods B16F10 cells were transfect with pSi-CD24, a siRNA plasmid target to CD24. Then the expression of CD24 was measured by RT-PCR and Western blot and the cell proliferation was assessed by MTT assay. Results CD24 expression was obviously down-regulated by pSi-CD24, and knockdown CD24 can effectively inhibited the proliferation of melanoma cells. Conclusion CD24 can enhance the proliferation of melanoma cells in vitro, which indicated CD24 play an important role in tumor growth.
【Key words】 CD24; Tumor; Proliferation
CD24是一种低份子量高度糖基化的卵白质粘附份子，作为P-挑选素的配体之一，CD24到场介导单核细胞、中性粒细胞与内皮细胞、血小板之间的粘附。最近几年来，临床研讨发明CD24高抒发于多种肿瘤细胞外表，并且与肿瘤的预后慎密亲密相干［1］。对其感化机制，以往研讨较多的集合的CD24与肿瘤转移的干系上，而CD24在肿瘤增殖中的感化研讨尚不非常明白。是以，本尝试用siRNA搅扰CD24的抒发，察看按捺CD24抒发对细胞的增殖的影响，开端切磋CD24在肿瘤成长中的感化。
1 材料与体例
1.1 试剂与仪器 引物、份子量Marker和质粒提取试剂盒(大连TaKaRa公司)；两步法RT-PCR试剂盒、Trizol 、Lipofectamine 2000 (美国Invitrogen 公司)；抗CD24 抗体和抗β-actin抗体(美国Santa Cruze公司)；ECL化学发光试剂盒(美国Pierce公司)； 卵白电泳仪、电转仪、杂交箱和酶标仪(美国Bio-Rad公司)。人玄色素瘤细胞株B16F10为本室保管。靶向CD24的siRNA搅扰质粒pSi-CD24由本室构建，按试剂盒申明书提取备用［2］。
1.2 体例
1.2.1 细胞培育和转染 取对数生持久的人玄色素瘤细胞B16F10细胞，接种于6孔细胞培育板内，待细胞到达80%融会时，根据申明书用脂质体Lipofectamine 2000转染细胞。尝试分为对比组和pSi-CD24组。
1.2.2 B16F10细胞中CD24 mRNA抒发的变更 转染24 h
后，用Trizol法提取细胞总RNA，根据申明书以Oligo-d(T)18为引物逆转录分解第一链cDNA，用特同性引物扩增CD24和β-Actin。引物序列和扩增体例见本课题组后期颁发的论文［2］。PCR产品用1.5%琼脂糖电泳，摄影，察看。
1.2.3 B16F10细胞中CD24卵白抒发的变更 转染48 h后根据试剂盒操纵步骤提取细胞总卵白，取20 μg样品煮沸变性后遏制SDS-PAGE电泳，转膜，5 %的脱脂奶粉37℃封锁1 h，加抗CD24(1∶1000)或抗β-Actin(1∶1000)单克隆抗体，4℃孵育留宿，洗膜，加辣根过氧化物酶标记的响应二抗浓缩液(1∶3000) 37℃孵育1 h，ECL法显影，惯例洗片摄影。
1.2.4 pSi-CD24对B16F10细胞增殖的影响 取空缺对比组和pSi-CD24组细胞细胞，接种至96孔板上，各组设4孔，在转染后0、24、48和72 h后插手MIT(5 mg/m1)20 μl，用MTT法检测细胞增殖情况，并绘制细胞成长曲线。
2 成果
2.1 pSi-CD24对CD24 mRNA和卵白抒发的影响 RT-PCR和Western blot成果显现，在一般情况下，玄色素瘤细胞B16F10高抒发CD24，而转染重组质粒pSi-CD24后，B16F10细胞中CD24 mRNA和卵白水平的抒发均较着降落，申明重组质粒pSi-CD24能按捺CD24的抒发。成果见图1。
2.2 pSi-CD24对B16F10细胞增殖的影响 MTT成果显现，转染pSi-CD24质粒后，玄色素瘤细胞B16F10的增值较着被按捺，在48 h和72 h与对比组差别有统计学意思。成果见图2。
3 会商
RNA搅扰(RNA interference, RNAi)是一种简略有用的基因缄默东西，首要经由进程引诱序列特同性的mRNA降解，从而产生响应的功效表型缺失，现已被普遍操纵于基因医治和功效基因组学的研讨中［3］。在哺乳植物细胞的RNAi研讨中，经由进程质粒等抒发载体在细胞内间接转录构成siRNA具备经济和轻易操纵、感化延续时候长等长处，是今朝siRNA最常用的体例。咱们后期接纳具备RNA聚合酶Ⅲ启动子的pSilencer 3.1载体，胜利构建了靶向CD24基因的抒发载体pSi-CD24［2］。本尝试用RT-PCR和Western blot在玄色素瘤细胞B16F10中发明，转染pSi-CD24质粒后细胞CD24在mRNA水平和卵白水平的抒发较对比组均有较着降落，申明pSi-CD24能够或许或许或许或许或许或许或许在细胞内延续抒发siRNA, 高效特异地按捺CD24的抒发，为进一步研讨CD24基因的功效和以CD24为靶点遏制肿瘤医治奠基了根本。
作为P-挑选素的配体，CD24高抒发能加强肿瘤的侵袭才能和转移才能［4］。研讨发明，在病理情况下CD24和P-挑选素介导了肿瘤细胞与血小板及内皮细胞的粘附与连系，肿瘤细胞与血小板连系后，构成血小板血栓，能够或许或许或许或许或许或许或许掩护肿瘤细胞回避免疫监督，降落免疫细胞对肿瘤的杀伤效应；肿瘤细胞和内皮细胞的粘附则有助于肿瘤细胞从轮回体系转移到构造中构成转移灶，是以，CD24/P-挑选素的连系被觉得与肿瘤转移慎密亲密相干。另有研讨证明CD24也介导了肿瘤细胞与纤维粘连卵白等细胞外基质的粘附感化，敲除CD24能够或许或许或许或许或许或许或许降落SW620细胞的粘附才能［5］。CD24对肿瘤的成长也具备调控感化，Smith等发明敲除CD24基因致使肿瘤细胞凋亡增添［6］。有学者觉得这与CD24能增进肿瘤微血管构成有关，也有研讨觉得与CD24促肿瘤细胞成长有关。本尝试操纵siRNA手艺敲除玄色素瘤B16F10细胞CD24基因抒发，发明按捺CD24抒发能够或许或许或许或许或许或许或许降落细胞的增值才能，申明CD24能够或许或许或许或许或许经由进程某些旌旗灯号路子增进肿瘤细胞增殖，进一步证明了上述成果。
综上所述，CD24在多种肿瘤中高抒发，与肿瘤的成长、粘附和转移慎密亲密相干，按捺CD24抒发能够或许或许或许或许或许或许或许降落肿瘤细胞的增殖才能、引诱肿瘤细胞凋亡、障碍肿瘤的转移，是以CD24能够或许或许或许或许或许是一个医治肿瘤的新靶点，但对其感化机制尚需进一步的深切研讨。
参 考 文 献
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软骨缺损是骨科临床非常罕见的疾病，但今朝却还没有有用的医治体例，不管是软骨的自体移植、同种异体移植、异体移植都没法知足整形内科及枢纽内科对软骨修复的须要。软骨构造工程的成长，为临床医治软骨缺损供给了新的体例，其缔造的野生软骨将是医治软骨缺损的抱负材料。
多向分解潜能的骨髓间充质干细胞(Bone mesenchymal stem cells，BMSc)具备来历普遍、体外培育时增殖分解才能强、在特定细胞因子引诱调控下向软骨分解等特色，被觉得是构造工程化软骨中最抱负的种子细胞。国际外学者颠末多年摸索，对BMSC的分解调控有了更深切研讨。同时，跟着中药研讨水平的深切，中药经由进程引诱BMSC感化于软骨构造工程已有了的进一步的成长，现将情况总结以下：
1中药引诱BMSc增值及向软骨分解研讨
1.1中药增进BMSc的增值
BMSC具备数量少、可主动分解等特色，不易节制其分解标的目的，曩昔研讨证明中药能够或许或许或许或许或许或许或许对其增殖分解产生影响。柳海峰[1] 研讨标明，补肾益骨汤提取物对体外培育的骨髓基质细胞增殖有较着增进感化。人参皂苷Rg1能够或许或许或许或许或许或许或许增进猪骨髓基质细胞的增殖分解，因为人参皂苷Rg1能够或许或许或许或许或许或许或许增进DNA的分解，促使细胞进入增殖周期，增进细胞内旌旗灯号传导。舒晓春[2]骨碎补总黄酮能增进兔BMSCs增殖。
1.2中药引诱BMSC向软骨分解
中药及中药复方提取物是经由进程多路子、多靶点引诱BMSC向软骨细胞分解，并具备毒副感化小、价廉等长处。国际外引诱骨髓干细胞向软骨分解过量地操纵化学制剂作引诱剂，有必然毒性或有较大副感化，操纵于人体内能够或许或许或许或许或许存在不宁静身分。国际研讨者多从补肝肾、壮筋骨的中药或中药复方动手寻觅宁静、有用的中药引诱剂。
肖鲁伟[3]、李楠[4]龟鹿二仙胶汤含药血清、右归饮能够或许或许或许或许或许或许或许有用地引诱骨髓基质细胞定向分解为软骨细胞。吴政安[5]消痹灵中药复丹方体外引诱大鼠骨髓间充质干细胞为类软骨细胞，引诱率与操纵地塞米松、维生素、TGF引诱培育体系无较着差别。吴险峰[6]茶黄素在细胞转化进程中与TGF-β1有协同感化增进骨髓间充质干细胞向软骨细胞转化，连系感化优于纯真TGF-β1。修忠标[7]鹿茸多肽对MSCs软骨细胞分解生物学行动的影响进程中与TGF一βl类似，在软骨引诱培育前提下可增进Ⅱ型胶原与GAG的抒发。并且经由进程按捺Caspase-3mRNA抒发及其卵白酶活性以禁止或逆转软骨表型化MSCs凋亡。李明波[8]彻骨消痛颗粒增进BMSC向软骨分解进程中Sox9因子的抒发，并按捺Cbfal因子的抒发，在必然水平上按捺其终末化，延缓软骨退变的进程。
总的来讲，中药或中药复方提取物引诱BMSC向软骨分解能够或许或许或许或许或许与药物增添Sox9、TGF－β的分解及某些受体的数量，起到增进Ⅱ型胶原的分解，从而定向分解为软骨细胞。
2中药在软骨构造工程中的操纵
今朝构造工程学操纵在临床上已进入一个新的阶段，四六三病院[9-10]操纵自体细胞打针医治股骨头坏死，经由进程将患者骨髓干细胞的体外扩增并遏制自体干细胞贯注，前后医治55例酒精性股骨头坏死、122例缺血性股骨头坏死。研讨提醒，自体骨髓干细胞体外扩增的手腕既处置异体移植的免疫排挤，同时避免种子细胞来历欠缺等题目，引诱自体骨髓干细胞向软骨分解将是处置骨科中软骨缺损的但愿。
中药已普遍操纵于构造工程学的研讨。比方：中药提取物建形成骨构造工程引诱修复材料―羊藿苷壳聚糖/羟基磷灰石复合材料[11]，具备杰出的骨传导性和骨引诱活性，能有用添补骨缺损并增进初期成骨，是一种抱负的骨构造工程引诱修复材料。中药双黄[12]能增进人牙周膜细胞增殖，为牙周构造工程的种子细胞供给了体外增值扩增的新体例。中药生肌液[13]能修复兔皮肤缺损，能够或许或许或许或许或许或许或许有用扩大皮肤缺损处的笼盖面积，延长皮肤缺损的愈合时候。
今朝，中药感化于软骨构造工程的研讨还绝对较少，首要经由进程中药灌胃共同BMSC复合体移植医治软骨缺损、中药提取物体外对软骨器官或软骨细胞的增进感化这两方面来考查中药修复软骨缺损成果的机制。如羊藿[14]中药提取物能够或许或许或许或许或许或许或许在体外增进软骨器官成长和细胞增殖，七叶亭[15]灌胃修复兔骨枢纽软骨缺损、独活寄生汤连系骨髓基质干细胞复合体修复兔膝枢纽软骨缺损等等。另外，张猛[16]对藻酸钠载体复合软骨细胞在黄茂甲昔感化下成软骨感化及机制遏制尝试性研讨、金翔[17]对威灵仙干涉干与可打针性C/β-GP凝胶复合同种异体软骨细胞体外三维培育及修复软骨缺损遏制了研讨。在寻觅适合BMSC软骨分解的三维平面材料进程中，中药制剂学在构造工程中愈来愈遭到了的正视，研讨与操纵将愈来愈普遍。
3瞻望
西医药文明是我国的文明宝藏，西医辨证施治能够或许或许或许或许或许或许或许较着减缓或按捺初期膝骨枢纽炎的枢纽软骨退变、削减枢纽滑液排泄、在软骨粉碎区呈现大批老练软骨细胞，加重膝骨枢纽炎的严峻水平[18]。中药如：骨碎补[19]、羊藿、秦皮、威灵仙、龟板等，中药复方如：独活寄生汤[20]、补肾健腰合剂[21]、复元胶囊[22]、腰痛舒胶囊[23]、强肌健力饮[24]等，都能掩护软骨细胞、有用增进软骨的修复，医治枢纽炎等感化。
今朝存在的首要题目是中药引诱剂的研讨层面逗留在体外对BMSC的软骨分解效应上，而对枢纽软骨细胞的再生修复机理上不完整了然。而中药成份庞杂，若何切确调控BMSc向软骨细胞转化成为研讨难点。中药引诱剂的研讨今朝处于起步阶段，国际的相干文献较少，有待学者们进一步研讨，但信任在未几未来，中药引诱BMSC向软骨细胞分解的感化路子和机制，能从份子细胞水平上取得进一步的阐释，更快地用于指点临床医治任务。
参考文献
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[择要] 多发性骨髓瘤（MM）属于一种血液体系肿瘤，基因染色体的渐变、MM瘤细胞和骨髓微情况的交换等均在其病发进程中阐扬着相当首要的感化。最近几年来，临床医治MM的热点已转变为对MM和骨髓微情况干系遏制深切的研讨，对各条非常活化的旌旗灯号通路遏制有针对性的医治进程中操纵靶向药物。该研讨起首概述了骨髓微情况在MM 病发机制中的感化，而后从沙利度胺及其衍生物、卵白酶体按捺剂、免疫医治与份子生物学医治三个方面临骨髓微情况在多发性骨髓瘤靶向医治现状遏制了阐发切磋。
关头词 骨髓微情况；多发性骨髓瘤（MM）；病发机制；感化；靶向医治现状
[中图分类号] R738 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2014）07（c）－0197-02
[作者简介] 董进梅（1973-），女，彝族，云南普洱人，本科，副主任医师。
骨髓微情况中各类成份能够或许或许或许或许或许或许或许增进MM瘤细胞的保存、增殖等，其路子是多条旌旗灯号转导通路的非常活化。今朝，临床存眷的核心是对MM在骨髓中的病发机制有一个清楚的熟悉，增进靶向医治针对性的较着晋升及药物对MM细胞毒性的较着加强，对耐药遏制有用的避免，对患者的预后遏制实在有用的改良等。该文现就骨髓微情况在多发性骨髓瘤病发机制中的感化及靶向医治现状作以下综述。
1 骨髓微情况在MM 病发机制中的感化
MM能够或许或许或许或许或许或许或许增进IL-6的旁排泄，详细机制为经由进程黏附份子和细胞外基质卵白，也便是黏附骨髓基质细胞，而IL-6又能够或许或许或许或许或许或许或许进一步增进MM细胞的增殖及存活，并对其遏制有用的保持。Chatterjee等医学学者研讨发明，人MM细胞的存活在存在骨髓基质细胞的情况下不会对IL-6 /gp130 / Stat3旌旗灯号通路遏制以来。同时证明，MM的产生和成长有黏附份子非常抒发的到场，咱们能够或许或许或许或许或许或许或许从以下两个方面看黏附份子非常抒发对MM病发机制的影响：①增进骨髓瘤前提细胞的归巢；②增进破骨细胞激活因子及骨髓瘤细胞成长因子的产生。MM细胞的归巢的介导身分为CD44、ICMA-1、MPC-1 (CD11b)、VLA-4、VLA-5等[1]。MM连系基质卵白及黏附基质细胞的情况下均会在极大水平上调理MM细胞的成长，详细机制为经由进程syndecan- 1和N 型胶原、VLA-4和纤连卵白的感化及VLA-4（位于MM细胞外表）连系VCVM-1（属于基质细胞）。MM细胞的成长和保存能够或许或许或许或许或许或许或许在syndecan -1黏附机制下取得极大的成长，对基质金属卵白酶(MMP) -1遏制引诱，使其产生，从而为骨的接收及肿瘤的浸润供给杰出的前提前提。P27及其余相干基因抒发水平会在MM细胞黏附纤连卵白的情况下回升，进而对细胞耐药遏制介导。IL-6的转录及排泄一方面会在MM黏附基质细胞的感化下产生严峻转变，另外一方面还会在MM细胞自身排泄VEGF等的感化下产生严峻转变，而IL-6的转录和排泄以来基质细胞NF-JB[2]。
2 骨髓微情况在多发性骨髓瘤靶向医治现状
2.1 沙利度胺及其衍生物
2.1.1 沙利度胺 20世纪50年月，沙利度胺初次进入欧洲市场。沙利度胺属于一种平静剂，曾在妊妇怀胎吐逆的医治中取得了必然的操纵，可是因为其会激发严峻的并发症，如胎儿畸形等，是以逐步插手了市场[3]。Singhal等医学学者在1999年对沙利度胺在复发及难治性多发性骨髓瘤中的杰出临床疗效遏制了初次报道，发明沙利度胺将其抗肿瘤感化阐扬出来的详细机制能够或许或许或许或许或许或许或许从以下几个方面看出：①沙利度胺能够或许或许或许或许或许或许或许对重生血管天生遏制有用的抵当；②沙利度胺能够或许或许或许或许或许或许或许对细胞外表粘附因子遏制有用的调理，同时对其彼此间的感化有着深远的影响；③会对瘤细胞及基质细胞的多种细胞因子排泄构成极大水平的影响，将其生物活性转变；④在T和NK细胞上感化能够或许或许或许或许或许或许或许增进宿主免疫杀伤骨髓瘤细胞感化的较着加强[4]。
2.1.2 沙利度胺衍生物 在MM的医治中，沙利度胺衍生物具备使人对劲的临床疗效，磷酸二酯酶按捺剂和非磷酸二酯酶按捺剂是其首要的分类，此中磷酸二酯酶按捺剂属于挑选性细胞因子按捺剂，能够或许或许或许或许或许或许或许对肿瘤坏死因子-A（TNF-A）遏制有用的按捺，不会激活T细胞；非磷酸二酯酶按捺剂属于免疫调理药物，能够或许或许或许或许或许或许或许将T细胞较着激活，对IL-2及INF-C遏制安慰[5]。免疫调理药物来那度胺是美国Celgene公司研发出来的，对T细胞增殖才能遏制激活的才能及对IL-2及INF-C排泄的安慰才能均较着比沙利度胺大。来那度胺还能够或许或许或许或许或许或许或许将MM细胞的耐药有用降服掉，从而对MM细胞的成长遏制有用的按捺。在其感化下，对美法仑及丝裂霉素等和地塞米松耐药的受害患者别离到达了总数的20%~35%和50%[6]。另外，来那度胺还能够或许或许或许或许或许或许或许增进地塞米松抗MM感化的较着加强。一切这些均告知咱们，在耐药MM的医治中，来那度胺具备极其广漠的操纵远景。
2.2 卵白酶体按捺剂
硼替佐米属于卵白酶体按捺剂，是FDA在2003年核准用药，在复发性难治性MM的医治中具备杰出的操纵成果，其能够或许或许或许或许或许或许或许对卵白酶体26S亚基遏制特同性按捺，增进I-JB降解的极大削减，并对NF-JB活性及IL-6触发的MAPK成长旌旗灯号遏制按捺，从而对MM细胞的增生遏制有用的按捺，构造MM细胞粘连骨髓基质细胞( BMSC )，对其遏制引诱，使其凋亡，对NF-JB激活产生的耐药性遏制有用的避免，同时实在有用地掩护抗IL-6，对骨髓血管的重生构成障碍，增进DEX疗效的较着加强[7]。在初发MM的医治中，单药硼替佐米到达了40%摆布的减缓率，而硼替佐米+美法仑+泼尼松(VMP)、硼替佐米+ 沙利度胺+ 地塞米松(VTD)等连系打算则能够或许或许或许或许或许或许或许到达70%~90%的减缓率[8]。今朝，临床相干医学学者正在经由进程尝试对第二代卵白酶体按捺剂遏制研讨，估计其对肿瘤细胞的感化将较着比硼替佐米高，而其不良反映则将较着比硼替佐米低。
2.3 免疫医治与份子生物学医治
在临床肿瘤的医治进程中，大批操纵细胞因子的医治体例在重组基因工程手艺中操纵细胞因子疗法的情况下成为能够或许或许或许或许或许，而今朝，在MM的医治中，白介素-2（IL-2）、IFN-C等是具备较为普遍操纵的细胞因子。IFN-A属于多功效细胞因子，能够或许或许或许或许或许或许或许对病毒及肿瘤细胞增殖活性遏制有用的抵当，同时还能够或许或许或许或许或许或许或许对人体免疫功效遏制有用的调理[9]。相干医学研讨标明，若是MM患者伴有细小残留病，那末IFN-A将会具备更加有用的医治成果[10]。最近几年来，在多发性骨髓瘤的医治中，IFN-A已取得了日趋普遍的操纵，出格是在保持医治引诱减缓后或自体造血干细胞移植后的MM的医治中更是具备不比的优胜性。IL-2在宿主抗肿瘤免疫的细胞因子中据有极其首要的地位，在极大水平上调理着细胞因子搜集，能够或许或许或许或许或许或许或许对T细胞的增殖和分解遏制有用的安慰，对其遏制引诱使其产生细胞毒性T细胞，较着增添NK细胞的数量，对B细胞遏制安慰使其增殖分解，对T细胞遏制有用使其将IFN-A和IFN-C排泄出来，同时使移植物抗肿瘤效应有用产生，将产生LAK细胞激活，在很多体内、体外的肿瘤细胞中消融，路子为MHC非限定性体例[11-12]。
综上所述，骨髓微情况在多发性骨髓瘤的病发机制中阐扬着相当首要的感化，靶向医治中沙利度胺在弥补医治初发骨髓瘤的进程中具备极其首要的感化，而ATO、VEGF受体按捺剂、法尼基转移酶按捺剂等则在不变复发或难治MM患者的进程中具备极其首要的感化。今朝，对患者遏制有用的分类，而后操纵有针对性的办法对患者遏制医治依然是临床须要存眷的课题。泛博相干医学学者应当更进一步深切详尽地研讨多发性骨髓瘤靶向医治等体例，觉得加重患者病痛、晋升对患者医治的有用率及病院的综合效益做出主动的进献。
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（收稿日期：2014-04-29）
论文西医学名词术语的操纵
1.冠之外国人名的体征、病名、尝试、综合征、体例、手术等，人名能够或许或许或许或许或许或许或许译成汉语，但人名后不加“氏”字；也能够或许或许或许或许或许或许或许用外文，但人名后不加“′s”。比方：Babinski征，能够或许或许或许或许或许或许或许写成巴宾斯基征，不写成Babinski′s征，也不写成巴宾斯基氏征。若为单字名则仍保留“氏”字。比方：福氏杆菌。
【关头词】 HSG；结直肠癌；良性腺瘤；一般粘膜
增殖按捺基因 (hyperplasic suppress gene，HSG) 是陈光慧等[1，2]操纵 mRNA差别显现手艺从一般血压和高血压大鼠的血管光滑肌细胞中发明的新基因。后期的研讨标明，高血压植物模子中HSG在增糊口跃的血管光滑肌中呈低水平抒发，并且转染外源性HSG可较着地按捺血管光滑肌细胞的成长，转染外源性HSG对多种肿瘤传代细胞系一样也具备较着的成长按捺和引诱凋亡的感化[3]。本文旨在察看HSG在差别结直肠构造中的抒发变更，开端切磋HSG对结直肠癌演化的影响。
1 材料和体例
1.1 临床材料
搜集唐山市工人病院 2003 年 12 月～2005 年 12 月手术切除的直肠癌标本 53 例，高分解癌 20 例，平分解癌 20 例，低分解癌 13例；此中男24 例，女29 例，春秋41 ～75 岁，均匀春秋 56 岁；Ⅰ+Ⅱ期 20 例，Ⅲ+Ⅳ期 33 例。淋逢迎转移阳性31例，淋逢迎转移阳性22例。一切患者术前均未遏制放疗、化疗或激素医治。以良性腺瘤标本31例和一般人粘膜构造37例做对比。
1.2 首要试剂
兔抗人 HRG1 多克隆抗体由北京大学陈光慧传授奉送；免疫构造化学染色试剂盒购自美国Santa Cruz 公司。
1.3 尝试体例
白腊切片构造55℃烤4h后，惯例脱蜡至水，3% H2O2 去除内源性过氧化物酶，卵白酶K 37℃ 消化10min，兔血清封锁非特同性抗原，插手HSG抗体，室温留宿，生物素标记二抗，酶标三抗，室温孵育各20min，DAB 显色，苏木精复染核，脱水，通明和封片。
1.4 成果鉴定
HSG以细胞浆、细胞膜或细胞核呈现棕黄色颗粒，且其着色强度较着高于背景者鉴定为阳性。
HSG计量体例：卵白抒发的鉴定以染色强度和阳性细胞百分率的得分之和遏制评定。（a）染色强度：阳性为 0，弱阳性为 1，阳性为 2，强阳性为 3；（b）阳性细胞百分率：无阳性细胞为 0，＜25% 为1，26%～50%为2，＞50%为3，a+b之和最高为6，0～2判为阳性，3～6判为阳性。
操纵Image Pro plus数码阐发体系遏制图象阐发，在光学显微镜下随机拔取5个视线，测定细胞的均匀光密度值和累计光密度值，计较测得值的均匀值作为终究值。
1.5 统计学阐发
一切数据以±s表现，SPSS11.0软件处置。样本均数的比拟接纳方差阐发，P＜0.05为差别有统计学意思，计数材料接纳χ2查验。
2 成果
2.1 HSG在结直肠差别构造中的抒发
HSG 阳性染色首要集合于细胞核四周，呈棕黄色颗粒，细胞浆有少许抒发，见图1、2、3。在结直肠癌中，HSG卵白抒发的均匀光密度值和积累光密度值较着低于一般粘膜和良性腺瘤对比组（P＜0.05），而一般粘膜和良性腺瘤组的HSG值差别无统计学意思（P＞0.05），见表1。表1 HSG在结直肠差别构造中的光密度值 *P＜0.01，同良性腺瘤组比拟；P＜0.01，同一般粘膜组比拟
与一般粘膜和良性腺瘤组比拟，结直肠癌组 HSG 抒发率呈降落趋向，差别有统计学意思(P＜0.05)，见表2。表2 HSG在结直肠差别构造中的抒发 * χ2=4.389 P＜0.05 ，同良性腺瘤组比拟；χ2=16.729 P＜0.01，同一般粘膜组比拟
2.2 HSG与结直肠癌临床病理参数之间的干系
HSG在高、中、低分解癌构造中的抒发别离为45.5% (9/20)、55.0% (11/20)、53.8%（7/13），χ2=0.458，P=0.795，差别无统计学意思；HSG在淋逢迎转移阳性组抒发率38.7% (12/31) 较着低于淋逢迎转移阳性组68.2% (15/22)，χ2=4.474，P=0.034；直肠癌Ⅲ+Ⅳ期中HSG阳性抒发率为33.3% (11/33)，较着低于Ⅰ+Ⅱ期中的80.0%(16/20)，χ2=4.74，P=0.029。
3 会商
增殖按捺基因（HSG）是陈光慧等操纵mRNA差别显现手艺对SHR和WKY大鼠血管光滑肌细胞(vascular smooth muscle cell，VSMC)cDNA文库遏制挑选时候手取得的一个与VSMC增殖相干的新基因，因其在SHR和VSMC中抒发活性降落而得名。基因全长4.16kb，可编码661个氨基酸，厥后发明，该基因不只在血管光滑肌内皮细胞中抒发，在心、肾、脑、肺、肝、白细胞等差别构造中也有普遍散布。有研讨揭露，转染hrg1卵白能按捺Raf (Raf1)和丝裂素活化卵白激酶(MAPK)活性，下调抗细胞凋亡基因(bcl2)和增殖细胞核抗原(PCNA)基因抒发及按捺细胞增殖[4]。姜广建[5]等发明HSG经由进程上调p27和下调cyclinE抒发而阐扬按捺VSMC增殖的感化。Santel等[6]发明，该基因能够或许或许或许或许或许或许或许节制线粒体的形状学变更，是以也与一些人类疾病相干，并在细胞信息的传导中起着首要的感化。HSG定位于人的1p36.3地位，此地区为很多肿瘤的渐变多发区，很多肿瘤患者染色体的这一区带会呈现缺失或易位。王萍[7]等研讨发明HSG对多种肿瘤传代细胞系具备较着的增殖按捺感化，与放线菌酮(CHX)并用可加强肿瘤细胞对 CHX的敏理性，具备协同感化，提醒HSG有能够或许或许或许或许或许是新的抑癌基因。
今朝，国际外还没有对HSG在肿瘤产天成长中抒发变更的相干研讨报道。本研讨操纵免疫组化法检测结直肠癌、良性腺瘤和一般粘膜构造中的HSG抒发，以期切磋HSG是不是具备按捺结直肠癌的恶性细胞增殖感化。成果标明：在结直肠癌组中，HSG卵白的抒发低于良性腺瘤组及一般粘膜组，而良性腺瘤与一般粘膜组抒发无差别，提醒HSG的抒发能够或许或许或许或许或许在按捺细胞恶性增殖中及结直肠癌的产天成长中起必然感化。这与李志新[8]察看的外源性转染大鼠HSG（rHSG）对肿瘤细胞具备较着且普遍的成长按捺感化成果类似。
HSG抒发与肿瘤分解水平有关，而与肿瘤淋逢迎转移和临床病理分期慎密亲密相干，提醒HSG无望作为鉴定肿瘤分解水平、病理分期的一种新的参考目标。
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